費林試劑法測定總糖
一、實驗目的
掌握用費林試劑法測定總糖的原理和方法。
二、實驗原理
還原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的單糖和某些二糖(如：乳糖、麥芽糖)。在堿性溶液中，還原糖能將金屬離子(Cu2+，Hg2+，Ag+等)還原，而糖本身被氧化成各種羧酸類化合物。
該特性常用于糖的定性和定量測定。本實驗采用費林試劑熱滴定法，費林試劑是氧化劑，由甲乙兩種溶液組成。甲液含硫酸酮和次甲基藍(氧化還原指示劑)；乙液含氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀。當甲、乙兩溶液混合時，硫酸銅與氫氧化鈉反應生成天藍色的氫氧化銅沉淀。在堿性溶液中，酒石酸鉀鈉與沉淀的氫氧化銅作用形成可溶性的絡合物。
費林(Feiling)試劑是含有Cu2+的堿性溶液，能使具有自由基或酮基的糖氧化，其本身則被還原成紅色或黃色的Cu2O(由于沉淀速度不同，形成的顆粒大小不同，顆粒大的為紅色，小的為黃色)。
三、儀器和試劑
儀器
酸式滴定管(25mL)、吸量管(5，10mL)、容量瓶(100mL)、電爐、錐形瓶(250mL)、滴管、點滴板。
試劑
1. 費林試劑(定量)
費林甲液 稱取15g 硫酸銅和0.05g 次甲基蘭，溶于1000mL 水中；
費林乙液 稱取50g 酒石酸鉀鈉，54g 氫氧化鈉和4g 亞鐵氰化鉀溶于1000mL 水中。
2. 標準葡萄糖溶液 稱取葡萄糖(預先在105℃ 烘干，恒重)1g，用少量蒸餾水溶解后加入8mL 濃鹽酸(防止微生物 生長)，再用蒸餾水定容至1000mL。
3. 6mol/L 鹽酸溶液
4. 10%氫氧化鈉
5. 85% 乙醇
6. 酚酞指示劑
7. 碘試劑(碘化鉀—碘溶液）
四、操作步驟
(一)空白測定
準確吸取費林甲乙液各5mL 和蒸餾水5mL 放入250mL 的錐形瓶中，再用滴定管加入定量的標準葡萄糖液，混勻后放在石棉網上加熱，應使瓶內溶液在2min 內達到沸騰，以每滴4～5s 的速度由滴定管滴入葡萄糖液直至藍色消失為止。沸騰前加入的標準葡萄糖溶液量與沸騰后滴定時所用的標準葡萄糖溶液量的總和，就是測定空白時耗用的標準葡萄糖液mL 數(V1)。
全部滴定過程必須在沸騰狀態下快速進行，一般應在3min 內完成。因此，除控制滴定速度外，滴定前需加入一部分標準葡萄糖液。加入該液的數量，應在正式滴定前的預備滴定試驗時確定，同時練習掌握操作條件。
(二)還原糖的測定
準確稱取山芋粉4g 放入250mL 錐形瓶中，加入85%乙醇50mL，在50℃恒溫水浴內浸提30min，并經常攪拌。過濾，收集濾液。濾渣按上法再用85%乙醇處理二次，過濾，用50℃的85%乙醇洗滌殘渣。合并上述濾液和洗滌液，蒸去乙醇，移入100mL 容量瓶內，用蒸餾水定容至刻度，即為測定還原糖的樣品液。
應用乙醇(80%~85%)提取待測樣品的還原糖，因為用水(甚至用冰水)或稀乙醇(10%)提取時，可溶性淀粉均能和還原糖一起溶解，從而導致測出的還原糖含量偏高，而淀粉含量偏低。若待測樣品內無可溶性淀粉(遇碘呈藍色)，則可用水提取還原糖。采用85%乙醇提取是假定樣品是干燥的，如果樣品含水量高，則乙醇濃度需相應提高。
準確吸取樣品液5mL 放在250mL 錐形瓶中，加入費林甲液、乙液各5mL，在電爐上加熱至沸，然后按空白測定的滴定速度滴入標準葡萄糖液直至藍色消失，記下滴定的mL 數(V2)。氧化作用與溫度、煮沸時間、溶液濃度和酸堿度等條件有密切關系，除準確量取試劑外，還應嚴格操作。在滴定樣品時，應與空白測定的操作條件盡可能一致。
(三)總糖的測定
準確稱取山芋粉1g，加入6mol/L 鹽酸10mL，蒸餾水15mL，混勻。沸水浴加熱30min 后，取出幾滴水解液用碘化鉀—碘溶液檢查水解是否完全，若已水解完全，則不呈現藍色。冷卻后加入酚酞指示劑1滴，用10%氫氧化鈉中和至溶液呈微紅色，過濾，濾液定容至100mL，準確吸取該溶液10mL，移入100mL 容量瓶內并定容至刻度，即為測定總糖的樣品液。
準確吸取樣品量5mL 放于250mL 錐形瓶內，加入費林甲液、乙液各5mL，混勻，然后按測定還原糖同樣操作進行滴定，記入耗用標準葡萄糖的mL 數(V2)。
五、計算
V1——為測定空白時耗用的標準葡萄糖體積(mL)。
V2—為測定還原糖或總糖時耗用的標準葡萄糖的體積(mL)。
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