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常用酶的配制

發(fā)布日期：2022-07-13 09:34:30

常用酶的配制

1．溶菌酶

　　用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分裝成小份并保存于-20℃。每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄。

　　2．蛋白水解酶類

	貯存液	貯存溫度	反應(yīng)濃度	反應(yīng)緩沖液	溫度	預(yù)處理
				0.01mol/L Tris（pH7.8）
鏈霉蛋白酶^a	20mg/ml	-20℃（溶于水）	1mg/ml	0.01mol/L EDTA	37℃	自消化^b
				0.5% SDS
				0.01mol/L Tris（pH7.8）
蛋白酶K^c	20mg/ml	-20℃（溶于水）	50μg/ml	0.005mol/L EDTA	37～56℃	無須預(yù)處理
				0.5% SDS

　　a：鏈霉蛋白酶是從鏈球菌（Streptomyces griseus）中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。

　　b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，經(jīng)自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下：把該酶的粉末溶解于10mmol./l Tris·HCl（pH7.5）、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml濃度，于37℃溫育1h。經(jīng)消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中，保存-20℃。

　　c：蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中純化得到。該酶有兩個(gè)Ca²⁺結(jié)合位點(diǎn)，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機(jī)理并無直接關(guān)系。然而，如果從該酶中除去Ca²⁺，由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所以，蛋白酶K消化過程中通常加入EDTA（以抑制依賴于Mg²⁺的核酸酶的作用）。但是，如果要消化對(duì)蛋白酶K具有較強(qiáng)耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l Ca²⁺而不含EDTA的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGT（pH8.0）至終濃度為2mmol/L,以鰲合Ca²⁺。