酶的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)—激動劑和抑制劑對酶活力的影響
【實(shí)驗(yàn)原理】
許多物質(zhì)能影響酶的催化活性，能加速酶的催化作用的物質(zhì)稱為激動劑，能抑制酶的催化作用的物質(zhì)稱為抑制劑。本實(shí)驗(yàn)分別考察MnCl 2 和HgCl 2 對堿性蛋白酶的激動和抑制作用。
【實(shí)驗(yàn)材料】
1. 實(shí)驗(yàn)器材
試管及試管架；漏斗及濾紙；恒溫水浴鍋；溫度計(jì)；移液管；721分光光度計(jì)
2. 實(shí)驗(yàn) 試劑
⑴ 1% 酪蛋白溶液：同酶特異性實(shí)驗(yàn)
⑵ 1/2000堿性蛋白酶溶液：同酶特異性實(shí)驗(yàn)
⑶ pH10 硼砂氫氧化鈉緩沖液: 同酶特異性實(shí)驗(yàn)
⑷ 8×10 -3 M MnCl 2 溶液
⑸8×10 -3 M HgCl 2 溶液
(6) 0.4 mol/L碳酸鈉溶液
⑺ 0.4 mol/L三氯醋酸溶液
⑻ 福林 試劑 : 同酶的特異性實(shí)驗(yàn)
【實(shí)驗(yàn)操作】
取三支 試管 , 按下表加入試劑：
試劑 | 試管 編號 | ||
1 | 2 | 3 | |
1% 酪蛋白溶液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
pH10 緩沖液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
8×10 -3 M MnCl 2 溶液(ml) | 1.0 | ― | ― |
8×10 -3 M HgCl 2 溶液(ml) | ― | 1.0 | ― |
蒸餾水(ml) | ― | ― | 1.0 |
1/2000堿性蛋白酶溶液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
實(shí)驗(yàn)結(jié)果 | |||
混合均勻后，于40℃ 水浴 中保溫15分鐘. 然后每管各加入0.4M 三氯醋酸溶液3.0ml，分別過濾，各吸取濾液1.0ml，加0.4M碳酸鈉溶液5.0ml，福林試劑1.0ml，搖勻，于40℃ 水浴 保溫15分鐘。顯色后用721型分光光度計(jì)，在波長680nm處測定光密度（比色時(shí)，以 蒸餾 水作空白）并記錄。
【注意事項(xiàng)】
1．每個(gè)人的唾液淀粉酶活性并不相同，有時(shí)差別很大，因此稀釋倍數(shù)可因個(gè)人情況而定。
2．少量的激動激或抑制劑就能影響酶的活性。但激動劑和抑制劑不是絕對的，有些物質(zhì)在低濃度時(shí)為某種酶的激動劑，而在高濃度時(shí)則為該酶的抑制劑。對一種酶是激動劑，對另一種酶是抑制劑。
3．反應(yīng)時(shí)間要準(zhǔn)確，做酶學(xué)實(shí)驗(yàn)所用的器皿必需潔凈、干燥，定量準(zhǔn)確。
【思考題】
1．什么是酶的最適溫度、最適pH值？有何實(shí)際意義？
2．影響酶的催化活性的因素有哪些？簡要說明作用原理。
3．酶學(xué)實(shí)驗(yàn)必須注意控制哪些條件？為什么？
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