薄層板的制備、活度測定及應用
目的要求
1．掌握薄層板的制備及薄層層析的操作方法
2．掌握吸附劑活度測定的原理及方法
3．應用薄層層析法檢測識中草藥化學成分
薄層板的制備
1．不加粘合劑的薄層涂布法
（1）氧化鋁薄層
將吸附劑置于薄層涂布器中，調節涂布器的高度，向前推動，即得均勻薄層。本實驗主要用下述簡易操作涂布薄層，取表面光滑，直徑統一的玻璃一支，依據所制備薄層的寬度、厚度要求，在玻璃棒兩端套上厚度為0.3~1mm的塑料圈或金屬環，并在玻璃棒一端一定距離處套上較厚的塑料圈或金屬環，以使玻璃棒向前推動時能保持平行方向，操作時，將氧化鋁粉均均地鋪在玻璃板上，勻速向前推動。
（2）纖維素薄層
一般取纖維素粉1份加水約5份，在燒杯中混合均勻后，倒在玻璃板上，輕輕振動，使涂布均勻，水平放置，待水分蒸發至近干，于100±2℃干燥30~60分鐘即得。
（3）聚酰胺薄層
取錦綸絲（無色干凈廢絲即可）用乙醇加熱浸泡2~3次，除去臘質等。稱取洗凈的錦綸絲1克，加85%甲酸ml，在水浴上加熱使溶，再加70%乙醇6ml。繼續加熱使完全溶解成透明膠狀溶液。將此溶液適量倒在水平放置的，用清潔液洗凈的玻璃片上，并自然向周圍推勻，厚度約0.3mm，薄層太厚時，干后會裂開。將鋪好的薄層水平放在盛溫水的盤上，使盤中的水蒸汽能熏濕薄層，盤子加玻璃板蓋嚴密，薄板放置約1小時完全固化變不透明白色，再放數小時后，泡在流水中洗去甲酸，先在空氣中晾干，后在烘箱中0℃恒溫加熱活化15分鐘，冷后置干燥器中貯存備用。
2．加粘合劑薄層的涂布法
（1）硅膠G薄層 取硅膠G或硅膠GF一份，置燒杯中加水約5份混合均勻，放置片刻，隨即用藥匙取一定量，分別倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推動涂布），均勻涂布成0.25~0.5mm厚度，輕輕振動玻璃板，使薄層面平整均勻，在水平位置放置，待薄層發白近干，于烘箱中100℃活化0.5~1小時，冷后貯于干燥器內備用。活化溫度和時間可依需要調整，一般檢識水溶性成分或一些極性大的成分時，所用薄層板只在空氣中自然干燥，不經活化即可貯存備用。
（2）硅膠（H）羧甲基纖維鈉（CMC-Na）薄層 取羧甲基纖維素0.2g，溶于25ml水中，在水浴上加熱攪拌使完全溶解，倒入燒杯中，加薄層層析用硅膠（顆粒度10~40μm的約6~8g）。
激光照排系統混成均勻的稀糊，按照硅膠G薄層涂布法制備薄層，或取0.8%羧甲基纖維納10ml，倒入廣口瓶（高約10~12cm）中，然后逐步加入薄層層析用硅膠3.3克，不斷振搖成均勻的稀糊，把兩塊載玻片面對面結合在一起，這樣每片只有一面與硅膠糊接觸，使薄片浸入硅膠稀糊中，然后慢慢取出，分開二塊薄片，將未粘附硅膠糊的那一面水平放在一張清潔的紙上，讓其自然陰干，100℃下烘30分鐘。冷后于干燥器內備用。未消耗的硅膠稀糊可貯存在廣口瓶內，以供再用。
氧化鋁薄層，氧化鋁羧甲基纖維鈉薄層的制備方法同上，一般所需要氧化鋁比硅膠稍多。
目前國內外市場有預先制好的薄層板，底板用玻璃、塑料、鋁片等。可按需要用玻璃刀劃割，也有用剪刀剪成所要的大小，使用方便，價格貴些。
3．特殊薄層的制備
根據分離工作的特殊需要，可制成以下幾種特制薄層。
（1）酸、堿薄層和pH緩沖薄層
為了改變吸附劑的酸堿性，以改進分離效果，可在吸附劑中加入稀酸溶液（如0.1~0.5N草酸溶液）代替水制成酸性氧化鉛薄層使用，硅膠微呈酸性，可在鋪層時用稀堿溶液（如0.1~0.5N氫氧化鈉溶液）代替水制成堿性的硅膠薄層。當用醋酸鈉、磷酸鹽等不同pH的緩沖液代替水鋪層，制成一定pH緩沖的薄層。
羧甲基纖維素鈉的溶液一般用0.5~1%濃度，宜預先配制后靜置，取其上層澄清溶液應用，則所制備的薄層表面較為細膩平滑。常用0.8%濃度。CMC-Na系中粘度。300~500厘泊（粘度單位）。CMC-Na系碳水化合物，調制時應在水浴上進行。活化溫度不應過高，防止碳化。
（2）絡合薄層
硝酸銀薄層的制法，可在吸附劑中加入5~25%硝酸銀水溶液代替水制成均勻糊狀，再按常法鋪成薄層，制成薄層避光陰干，于105℃活化半小時后避光貯存，制成的薄層以不變成灰色為好，在三天內應用。也可先把硝酸銀用少量水溶解，再用甲醇稀釋成10%溶液，把預先制好的硅膠G薄層浸入此溶液中約1分鐘，取出避光陰干，按上法活化，貯存。
吸附劑的活度測定
1．氧化鋁活度的測定
一般可用4~5種偶氮染料以薄層層析法進行測定。
染料試劑的配制：取偶氮苯（Azobenzene）50mg，對甲氧基偶氮苯（P-Methoxyuzobenzene）,蘇丹黃（Sudan I, Benzeneazo-β-naphthol），蘇丹紅（Sudan Ⅲ Tetrazobenzol-β-naphthol），對氨基偶氮苯（P-Aminoazobenzene）各20mg，分別溶于50ml重蒸餾的四氯化碳（經氫氧化鈉干燥）中。
常法制備不含粘合劑氧化鋁薄層，以鉛筆尖或毛細管尖在薄層板一端2~3 cm處間隔1cm左右輕輕點上5個可以看清的小點，各吸取約0.02ml染料試劑分別點滴于原點上，以四氯化碳為展開劑，展開時薄層板與容器底部交角為10~40°之間，展開后測出各斑點的Rf值，從表1確定氧化鋁的活度（一般高活性氧化鋁Ⅰ~Ⅲ級活度使用本法時，結果往往偏低）。
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