維生素C的定量測定（2，6-氯酚靛酚滴定法）
一、目的：
1．學習維生素C定量測定的一般原理，掌握用2，6-二氯酚靛酚滴定法定量測定食物和生物體液中維生素C的基本操作技術。
2．概括了解維生素C的生理意義及其在新鮮水果和蔬菜中的含量。
二、原理：
維生素C是人類膳食中必需的維生素之一，如果缺乏維生素C，將導致壞血病發生。因此，維生素C又稱為抗壞血酸，有防治壞血病的功效。抗壞血酸在自然界分布十分廣泛，存在于新鮮水果和蔬菜中，尤其是檸檬果實和一些綠色植物（如青辣椒、菠菜等）中含量特別豐富。
抗壞血酸在機體同具有廣泛的生理功能，已知體內許多重要物質的代謝反應都需要抗壞血酸的參與。它是脯氨酸羥基化酶的輔酶，故有增進 膠原蛋白 合成的作用。機體中許多含疏基的酶，需要依賴于作為還原劑的抗壞血酸的保護，使酶分子的疏基處于還原狀態，從而維持其催化活性。由于抗壞血酸的氧化還原作用，它可促進免疫球蛋白的合成，增強機體的抵抗力。同時還能使氧化型谷胱甘肽轉化為還原型谷胱甘肽（簡稱GSH），而GSH可與重金屬結合而排出體外，因此維生素C常用于重金屬的解毒。此外，抗壞血酸尚有許多其他生理功能，但其作用機理還不十分清楚。
抗壞血酸是一種不飽和的多羥基內酯化合物，稍有酸味的糖類白色晶體，易溶于水，故屬于水溶性維生素。在溶液中其分子內C2和C3之間的烯醇式羥基上的氫極易解離并釋放出H+，而被氧化成脫氫抗壞血酸，氧化后仍具有維生素C的生理活性，但它易分解為二酮古洛糖酸，此化合物不再具有維生素C的生理活性。維生素C有很強的還原性，在堿性溶液中加熱并有氧化劑存在時，易被氧化而破壞。還原型和氧化型抗壞血酸可以互相轉變，在生物組織中自成一氧化還原系統。
由于維生素在營養學和臨床方面的重要意義，故對食物和生物材料中維生素含量的測定是十分必須的。抗壞血酸的定量測定方法很多，有2，6-二氯酚靛酚（簡稱DCIP）滴定法、碘滴定法、2，4-二硝基苯肼法、Folin 試劑 比色法、紫外吸收法等。其中廣泛采用的是DCIP滴定法，它具有簡便、快速、比較準確等優點，適用于許多不同類型樣品的分析。缺點是不能直接測定樣品中的脫氫抗壞血酸及結合抗壞血酸的含量，易受其他還原物質的干擾。如果樣品中含有色素類物質，將給滴定終點的觀察造成困難。
在酸性環境中，抗壞血酸（還原型）能將染料2，6-DCIP還原成無色的還原型
2，6-DCIP，而抗壞血酸則被氧化成脫氫抗壞血酸。氧化型的2，6-DCIP在中性或堿性溶液中呈藍色，但在酸性溶液中則呈粉紅色。因此，當用2，6-DICP滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時，在抗壞血酸未被全部氧化前，滴下的2，6-DCIP立即被還原成無色，一旦溶液中的抗壞血酸全部被氧化時，則滴下微量過剩的2，6-DCIP便立即使溶液顯示淡粉紅色或微紅色，此時即為滴定終點，表示溶液中的抗壞血酸剛剛全部被氧化。依據滴定時2，6-DCIP標準溶液的消耗量（ml），可以計算出被測樣品中抗壞血酸的含量。氧化型2，6-DCIP與還原型抗壞血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中進行反應。即先將樣品溶于一定濃度的酸性溶液中或經抽提后，再用2，6-DCIP標準溶液滴定至終點。
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