pH對酶促反應速度的影響
【目的和要求】
1. 了解pH對酶促反應速度的影響。
2. 學習測定酶的最適pH的方法。
【實驗原理】
酶促反應受環境pH的影響極為顯著。 通常各種酶只有在一定的pH范圍內才表現它的活力，一種酶表現其活性最高時的pH值，稱為該酶的最適pH。低于或高于酶的最適pH時，酶的活性逐漸降低。不同酶的最適pH值不同。本實驗仍以乳酸脫氫酶催化的反應為例，學習測定酶的最適pH的方法。
【實驗試劑和器材】
（一）試劑：
1. 不同pH值的緩沖液:
100ml 0.33M檸檬酸，100ml 0.33M磷酸，3.54g 硼酸，343ml 1M NaOH, 加水直到1升。用HCl滴定成pH值3.0、3.5、4.0、4.5直到12的不同pH值緩沖液。
2. 0.01M NADH
3. 0.1M 丙酮酸鈉
4. LDH
【實驗試劑和器材】
（一）試劑：0.1M磷酸鉀緩沖液（pH 7.0）；0.01M NADH; 10M 丙酮酸鈉；LDH
（二）器材：紫外分光光度計 ，移液槍，吸頭，1.5ml小離心管，離心管架
【實驗方法】
（一）酶活性的測定：方法同實驗7中的步驟1。
（二）pH對酶促反應速度的影響：
1. 在1.5 ml小離心管中分別加入：(總體積為1ml反應液)
2. 混勻以上試劑，倒入比色皿中，然后將比色皿放入分光光度計后讀取340nm處OD值，加入0.02ml LDH使用液，迅速攪勻，使反應開始，測定反應1分鐘OD值的變化。
3. 根據所測得的OD值的變化，計算出反應初速度，填入下表：
3. 以pH為橫坐標，反應速度為縱坐標做出v – pH曲線圖，求出LDH的最適pH值。
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