幾種染色劑的使用原理、使用方法歸納
1.甲基綠和吡羅紅：
實(shí)驗(yàn)原理:
甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和RNA的親和力不同,甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色,吡羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色.利用甲基綠,吡羅紅混合染色劑將細(xì)胞染色,可以顯示DNA和RNA在細(xì)胞中的分布.
試劑及配制方法
（1）試劑 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的NaCl溶液，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%的鹽酸，乙酸鈉，乙酸，蒸餾水，吡羅紅甲基綠混裝粉。如果化學(xué)試劑商店沒有吡羅紅甲基綠混裝粉，可以分別購買甲基綠和吡羅紅G，然后按A液的第二種方法配制（見下文）。
（2）染色劑的配制
①染色劑A液的兩種配制方法
第一種方法：取吡羅紅甲基綠粉1 g，加入到100 mL蒸餾水中溶解，然后用濾紙過濾，將濾液放入棕色瓶中備用。
第二種方法：取甲基綠2 g溶于98 mL蒸餾水中，取吡羅紅G 5 g溶于95 mL蒸餾水中。取6 mL甲基綠溶液和2 mL吡羅紅溶液加入到16 mL蒸餾水中，即為A液，放入棕色瓶中備用。（注意：用于核酸染色的是吡羅紅G，請不要錯(cuò)買吡羅紅B。）
②染色劑B液的配制方法 B液是一種緩沖液，由乙酸鈉和乙酸混合而成。先取乙酸鈉16.4 g，用蒸餾水溶解至1 000 mL備用；再取乙酸12 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL備用。取配好的乙酸鈉溶液30 mL和稀釋的乙酸20 mL，加蒸餾水50 mL，配成pH為4.8的B液（緩沖液）。
③染色劑的配制染色劑是由A液、B液混合配制而成的。取A液20 mL和B液80 mL混合，就是實(shí)驗(yàn)中所用的吡羅紅甲基綠染色劑。應(yīng)該注意的是該試劑應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。
2.龍膽紫和醋酸洋紅： |
染色質(zhì)(體)容易被堿性染料染成深色。作為染色劑必須具備兩個(gè)條件：一是具有顏色；二是要與被染組織間有親和力。染料的顏色和它與組織間的親和力是由染料本身的分子結(jié)構(gòu)決定的，產(chǎn)生顏色的發(fā)色基團(tuán)和與組織間產(chǎn)生親和力的助色基團(tuán)共同決定了染色劑的染色性質(zhì)。作為染料物質(zhì)，除了有發(fā)色基團(tuán)外，還需要有一種使化合物發(fā)生電離作用的助色基團(tuán)。染色劑的酸、堿性界定并非由染料溶液的pH值決定，而是根據(jù)染料物質(zhì)中助色基團(tuán)電離后所帶的電荷來決定。一般來說，助色基團(tuán)帶正電荷的染色劑為堿性染色劑，反之則為酸性染色劑。
醋酸洋紅常被用作核、染色體的固定和染色劑。在煮沸的45％醋酸中加洋紅使之飽和，再加入微量的鐵離子，便使醋酸洋紅材料在為醋酸固定的同時(shí)，洋紅將核或染色體染成紅色。用龍膽紫可將染色體染成藍(lán)紫色。
3.伊紅美藍(lán)：伊紅和美藍(lán)是兩種苯胺類染料，可以抑制革蘭氏陽性菌的生長。同時(shí)，這些染料可以區(qū)分那些發(fā)酵乳糖的微生物。大腸菌群因其強(qiáng)烈發(fā)酵乳糖而產(chǎn)生大量的混合酸，使菌體表面帶上正電荷，可染上伊紅染料，伊紅與美藍(lán)結(jié)合，菌體被著上深紫色，在含有兩種染料呈紫色的培養(yǎng)基上，形成帶核心、具金屬光澤的菌落。因此可以用伊紅和美藍(lán)鑒別革蘭氏陰性菌（大腸桿菌）的存在。
4.二苯胺：
二苯胺是一種非極性芳香族有機(jī)分子，有毒，熔點(diǎn)比水低，微溶解于水，易溶解于酒精、冰乙酸等有機(jī)溶劑。化學(xué)性質(zhì)活潑，遇光易變色。因此要放置于暗處保存。
二苯胺試劑鑒定DNA的原理：DNA分子中的脫氧核糖在酸性環(huán)境下生成ω-羥基-γ-酮基戊醛，再與二苯胺試劑結(jié)合顯藍(lán)色，顏色的深淺與溶液中的DNA含量成正比。
二苯胺試劑的配制：A液：1.5克二苯胺溶解于100ml冰乙酸中,在加入1.5ml濃硫酸(此處濃硫酸的作用可能是作為強(qiáng)氧化劑來維持試劑的穩(wěn)定)，配制好的A液保存在棕色瓶中。B液：體積分?jǐn)?shù)為0.2%的乙醛。由于乙醛是一種還原性試劑，所以實(shí)驗(yàn)前不能將A液和B液混合在一起。同時(shí)因?yàn)槎桨吩噭┬再|(zhì)不穩(wěn)定，極易變色，因此建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
5.雙縮脲：鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時(shí)，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑，發(fā)生的是雙縮脲反應(yīng)。雙縮脲反應(yīng)實(shí)質(zhì)是在堿性環(huán)境下的銅離子與雙縮脲試劑發(fā)生的紫色反應(yīng)。而蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲（H2NOC－NH－CONH2）結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，所以蛋白質(zhì)都能與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)，可以用雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)的存在。
6.斐林試劑：由氫氧化鈉 的質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為0.1 g/mL的溶液和硫酸銅 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05 g/mL的溶液，還有酒石酸鉀鈉配制而成的。它與可溶性的還原性糖 (葡萄糖 ）、果糖 和麥芽糖 )在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的氧化亞銅 沉淀 。因此，斐林試劑常用于鑒定可溶性的還原性糖的存在與否。
7.班氏試劑：
班氏試劑常用于尿糖的鑒定，其配方與斐林試劑不一樣，其配方為：
①400ml水中加85g檸檬鈉和50g無水碳酸鈉；
②50ml加熱的水中加入8.5g無水硫酸銅。制成溶液；
③把溶液倒入檸檬酸鈉溶液中，邊加邊攪，如產(chǎn)生沉淀可濾去。
（2）其反應(yīng)原理與斐林試劑略有差別。利用斐林試劑鑒定時(shí)，斐林試劑甲和斐林試劑乙直接反應(yīng)生成和可溶性還原糖反應(yīng)產(chǎn)生磚紅色沉淀。而班氏試劑中的產(chǎn)生卻是這樣的：檸檬酸鈉和碳酸鈉均為強(qiáng)堿弱酸鹽，在水中它們均可水解產(chǎn)生，與檸檬酸鈉溶液和溶液混合時(shí)，結(jié)合，生成與葡萄糖中的醛基反應(yīng)生成磚紅色沉淀。
（3）兩種試劑的保存方式不同。斐林試劑甲和斐林試劑乙可強(qiáng)烈產(chǎn)生，很容易沉淀析出，因此斐林試劑一般為現(xiàn)用現(xiàn)配；而班氏試劑的配方中，檸檬酸鈉為一對緩沖物質(zhì)，產(chǎn)生的數(shù)量有限，與溶液混合后產(chǎn)生的濃度相對較低，不易析出，因此該試劑可長期保存。
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