脂肪酶活性測(cè)定方法
具體步驟如下:
取100 ml,三角瓶4個(gè),每瓶加人5 mL磷酸緩沖液(pH= 7.5 , 0.02 5mol/1)和4m l,聚乙烯醇橄欖油乳化液,置于37 C水浴中保溫5 min,然后在兩個(gè)瓶中各加人1 MI.酶液。
從加人酶液開(kāi)始精確計(jì)算時(shí)間,繼續(xù)保溫10 min,取出后立即加入95%乙醇5 ml,,以停止酶作用,再加酚酞指示劑3滴,用0.0 5m ol/I,的氫氧化鈉滴定至溶液呈粉紅色為止,另外兩個(gè)錐形瓶不加酶液,也繼續(xù)保溫15 min后,立即取出,各加人15 MI 95%乙醇作為對(duì)照。
取平均值計(jì)算酶的活性或相對(duì)活性..酶活力定義為在37 C pH=7.5條件下,每分鐘催化生成1 pmol脂肪酸所需的酶量為一個(gè)活力單位(U)。
還需要確定具體脂肪酶的性質(zhì),是酸性還是堿性,最適作用pH 以及溫度,通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定,從而調(diào)整測(cè)定時(shí)磷酸緩沖液pH值,溫度等具體條件。
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