PCR標本的處理及模板制備的注意點
不同來源的標本的處理及模板制備是PCR反應中關鍵之一。從理論上講PCR具有極高的敏感性和特異性，甚至在數小時內通過幾十次循環可以檢測到一個或幾個靶基因目的DNA的存在。但是在實踐中人們常會發現，標本的處理和模板的制備不僅影響著PCR反應 的成敗，而且影響著其反應的敏感性和特異性。
為了保證PCR反應的順利進行，十多年來人們已先后建立了許多常規標本處理的方法，但是近年來PCR技術在臨床檢驗中的廣泛應用， 要求在保證準確性的前提下，快速、簡便、特異性地對疾病作出診斷。臨床醫生要在極短的時間內同時處理數量龐大的微量標本，這就要求各PCR 試劑 盒生產廠家提供符合上述要求的臨床標本處理 試劑 盒。
標本的處理及模板的制備應注意以下幾點：
1． 臨床標本的取樣來源要準確，標本的處理要及時。如不能及時處理要置-20℃低溫保存。如被檢物為RNA，則待測標本應在2小時以內作出處理。
2． 標本預處理的目的是有效地釋放出被測病原體及消除標本中存在的抑制PCR擴增反應的抑制物。由于各種病原體侵染人體部位及途徑各不相同，臨床標本來源各異，如外周血、尿、大便、痰、胸腹水、支氣管灌注液、心包積液、咽部分泌物、各種癌組織、石蠟切片、尿道分泌物、絨毛、尖銳濕疣、陰道分泌物等等。標本的預處理也就不盡相同，但其目的完全相同。同時也應注意在標本的預處理中，要防止標本的降解，若為RNA標本最好加入抑制RNA酶的試劑。
3． 模板制備的目的是制備適于PCR擴增的核酸，以確保PCR擴增的敏感性和特異性，盡量防止非特異性擴增。過去，DNA模板的制備中常采用加 蛋白酶 K、GDS等處理標本，然后用氯仿一酚抽提，無水乙醇沉淀DNA的方法。該法的優點是制備的DNA純度較高，PCR擴增的特異性好；缺點是操作麻煩，易造成微量標本的丟失或標本間的交叉污染，不適于臨床標本的處理。
針對臨床標本的特點，許多新的、快速處理標本的方法應運而生，尤其是各類快速核酸提取試劑盒的研發生產，為PCR技術在臨床標本檢測中的廣泛應用提供了保證。
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