GB 4789.2-2016 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定
GB 4789.2-2016 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定
一、菌落總數(shù)的定義
食品檢樣經(jīng)過處理,在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間等)培養(yǎng)后,所得每g(ml)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù).
在GB4789.2-2016的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果,只包括一群在平板計(jì)數(shù)瓊脂上生長(zhǎng)發(fā)育的嗜中溫需氧菌或兼性厭氧菌的菌落總數(shù).
注意:有的平板計(jì)數(shù)瓊脂上長(zhǎng)一片霉菌,則此次試驗(yàn)結(jié)果作廢,需重新檢測(cè)(霉菌屬于真菌類,它產(chǎn)生的霉菌毒素抑制普通菌的生長(zhǎng),所以若有一大片霉菌生長(zhǎng)需重新檢測(cè),并清理實(shí)驗(yàn)室.)
二、菌落總數(shù)測(cè)定的衛(wèi)生學(xué)意義
檢測(cè)食品本身的新鮮程度和加工、貯存運(yùn)輸過程中是否受到污染.
必須配合大腸菌群的檢驗(yàn)和其他病原菌項(xiàng)目的檢驗(yàn),才能作出比較全面準(zhǔn)確的判定.
三、2016版國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的主要變動(dòng)
拍擊式均質(zhì):方便,只需購(gòu)置一次性無菌均質(zhì)袋；快捷,1-2min內(nèi)完成均質(zhì)；科學(xué),均質(zhì)過程中不會(huì)產(chǎn)生高溫；均質(zhì)均勻,可使樣品菌完全稀釋出來；此方法不適合均質(zhì)堅(jiān)硬樣品,如魚骨類樣品.
培養(yǎng)基:平板計(jì)數(shù)瓊脂
平板計(jì)數(shù)瓊脂PCA
2010版和2016版
胰蛋白胨5.0g
酵母浸膏2.5g
葡萄糖1.0g
瓊脂15.0g
蒸餾水1000ml
營(yíng)養(yǎng)瓊脂NA
2003版
蛋白胨10.0g
牛肉膏3.0g
氯化鈉5.0g
瓊脂15.0g
蒸餾水1000ml
培養(yǎng)基改變依據(jù):國(guó)外食品微生物檢驗(yàn)的權(quán)威方法(ISO、FDA、AOCAC)均采用PCA,它的營(yíng)養(yǎng)更優(yōu)化.
計(jì)數(shù)和報(bào)告:平板和菌落選取原則
選取每個(gè)平皿菌落數(shù)在30-300CFU之間、無蔓延菌落生長(zhǎng)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù).每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù).
有較大片狀生長(zhǎng)菌落的平板不易采用.
如片狀菌落不足平板一般,而另一半平板菌落分布均勻,可計(jì)分布均勻的一半,再乘以2.
如平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界限的鏈狀生長(zhǎng)時(shí),則每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)算.
計(jì)數(shù)和報(bào)告:菌落總數(shù)計(jì)算方法
如果只有一個(gè)稀釋度平板的菌落數(shù)在30-300CFU適宜范圍內(nèi),則計(jì)算該稀釋度兩個(gè)平板菌落平均數(shù),再乘以稀釋倍數(shù),作為每g(ml)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果.
若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)均在30-300CFU適宜范圍內(nèi),按公式N=∑C/(n1+0.1n2)d計(jì)算.N:樣品中菌落數(shù),∑C:含適宜范圍CFU的平板菌落數(shù)之和,n1:第一稀釋度(低稀釋度)平板個(gè)數(shù),n2:第二稀釋度(高稀釋度),d:稀釋因子(第一稀釋度).
所有平板菌落數(shù)均＞300,計(jì)最高稀釋度平板的平均菌落數(shù).
所有平板菌落數(shù)均＜30,計(jì)最低稀釋度平板的平均菌落數(shù).
樣品原液和所有稀釋度平板均無菌生長(zhǎng),以＜1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算.
所有稀釋度平板菌落數(shù)均不在30-300之間,有些＜30,有些＞300,則最接近30-300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算.
計(jì)數(shù)和報(bào)告-結(jié)果報(bào)告(采取四舍五入法)
五、其他注意事項(xiàng)
1.如樣品(干調(diào)、面粉、脫水蔬菜)中可能含有在瓊脂表面蔓延生長(zhǎng)的菌落,可在凝固后的瓊脂表面再覆蓋一層(4ml)培養(yǎng)基.這樣可以有效防止菌落蔓延的現(xiàn)象出現(xiàn).
2.稀釋液選擇:
3.磷酸鹽緩沖液:適用于偏酸或偏堿性樣品的稀釋.
生理鹽水:適用于常規(guī)樣品的稀釋
3.傾注平板計(jì)數(shù)瓊脂在15-20ml,一般要求達(dá)到18ml以上,即瓊脂高度＞3mm.若傾注的培養(yǎng)基太薄,菌需要的營(yíng)養(yǎng)成分不夠,使菌生長(zhǎng)的不完好,不便于觀察結(jié)果.
4.樣品與培養(yǎng)基一定要混合均勻,建議混勻方法:上下?lián)u晃-左右搖晃-順時(shí)針搖晃-逆時(shí)針搖晃.若混合不均勻,有的菌落會(huì)長(zhǎng)到平板邊緣,不便于觀察,影響最終結(jié)果.
5.培養(yǎng)基水浴溫度和傾注溫度在46±1℃.培養(yǎng)基的冷卻方法:要在恒溫水浴鍋中通過水來冷卻；不可直接放到試驗(yàn)臺(tái)或地面上冷卻,因這樣培養(yǎng)基底部容易先凝固,傾注培養(yǎng)基時(shí),有凝固塊到處,導(dǎo)致培養(yǎng)基有結(jié)塊,即不美觀,又影響觀察結(jié)果.
6.培養(yǎng)條件:一般樣品36±1℃培養(yǎng)48±2h,水產(chǎn)品(指原生態(tài)、未經(jīng)過加工的水產(chǎn)品原料),它的培養(yǎng)溫度要接近原生態(tài)的溫度,即30±1℃,培養(yǎng)72±3h.
7.樣品稀釋液有時(shí)會(huì)帶有細(xì)碎的食物顆粒(如奶粉、堅(jiān)果),為避免這些顆粒與菌落發(fā)生混淆,可將樣品稀釋液與PCA混合,單做培養(yǎng),置于4℃冰箱放置同樣時(shí)間,以便在計(jì)數(shù)時(shí)作為對(duì)照.(營(yíng)養(yǎng)瓊脂可加紅四氮唑來區(qū)別菌和顆粒,一般不建議使用)
8.必須做空白對(duì)照:檢測(cè)培養(yǎng)基、平皿、稀釋液的無菌程度.同時(shí),應(yīng)在工作臺(tái)內(nèi)打開一塊空白PCA(其暴露時(shí)間應(yīng)與檢樣時(shí)間相當(dāng)),以了解樣品在檢驗(yàn)過程中有無受到來自環(huán)境的污染.
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